Invitrogen™ Platinum™ SuperFi II DNA Polimeraz Enzimi, PCR Master Mix, Green PCR Master Mix Kitleri
Thermo Fisher Scientific™ Invitrogen™ Platinum™ SuperFi II DNA Polimeraz (DNA Polymerase), PCR’nize üstün aslına uygunluk ve özgünlük sağlayan, sıcak başlangıçlı, mühendislik ürünü bir düzeltme okuma DNA polimerazıdır. >300x Taq aslına uygunluğu ve 60°C’de primer tavlama için özel olarak formüle edilmiş tamponu ile Thermo Fisher Scientific Invitrogen™ Platinum™ SuperFi II DNA Polimeraz, klonlama, dizileme ve mutajenez gibi en yüksek PCR doğruluğu gerektiren PCR uygulamalarında verimlilik ve basitlik sunar.
Uygulamalar
- Yüksek kaliteli ve verimli PCR
- Klonlama ve alt klonlama
- Bölgeye yönelik mutagenez
- GC açısından zengin template amplifikasyonu
- Sıralama için şablon oluşturma
- Optimum olmayan saflıkta numunelerin amplifikasyonu
- Uzun PCR
- Hızlı PCR
Invitrogen™ PCR Platinum™ SuperFi II DNA Polimeraz
- Olağanüstü doğruluk—Yeni nesil sıralama ile belirlendiği üzere 300x’ten daha yüksek Taq aslına uygunluğu
- Basitleştirilmiş iş akışı—60°C’de primer tavlama için formüle edilmiş arabellek (Tm hesaplayıcısına gerek yoktur)
- Artan PCR başarısı—GC açısından zengin hedeflerin sağlam amplifikasyonu, optimal olmayan saflıkta DNA ve uzun diziler
- Etkinleştirilmiş otomasyon—Invitrogen Platinum sıcak başlatma teknolojisiyle etkinleştirilen, reaksiyon kurulumundan sonra 24 saat boyunca yüksek özgüllük ve masaüstü kararlılığı
- Azaltılmış pipetleme—Doğrudan jel yüklemeli boyalarla veya boyalar olmadan ana karışım seçenekleri mevcuttur
PCR Platinum™ SuperFi
>300x Taq Uygunluğu
Platinum SuperFi II DNA Polimeraz, son derece düşük hata oranıyla DNA dizi doğruluğunu korumak için en yüksek düzeyde güven sunar. Yeni nesil dizileme kullanılarak, Platinum SuperFi II DNA polimerazın nispi aslına uygunluğu, Taq DNA polimerazınkinin >300 katı olarak hesaplanmıştır.
Taq enzimine göre ticari olarak temin edilebilen enzimler arasında aslına uygunluk karşılaştırması. 3.9 kb’lik bir dizi, farklı DNA polimerazları kullanılarak PCR ile büyütüldü ve elde edilen PCR amplikonları daha sonra bir MuA transpozazı ile parçalandı. 12 rastgele nükleotitten oluşan benzersiz moleküler tanımlayıcılar (UMI), her ürünü ayrı ayrı etiketlemek için parçalanma sırasında tanıtıldı. Yeni nesil dizilemeden sonra, okumalar doğru diziye göre hizalandı, UMI aileleri tarafından gruplandırıldı ve hatalar çağrıldı. Hatalar, yalnızca UMI ailesindeki tüm okumalarda mevcutsa tanımlandı; aksi takdirde sıralama hataları olarak atıldılar. Polimeraz aslına uygunlukları Taq DNA polimerazına normalleştirildi. |
Platinum SuperFi II PCR DNA Polimeraz Kiti ile Yüksek Verim & Özgüllük
Platinum SuperFi II DNA Polimeraz, enzimin sağlamlığı ve üstün sıcak başlangıç teknolojisi sayesinde yüksek özgüllük ve verim ile çok çeşitli hedef uzunlukları çoğaltır. Antikor bazlı Platinum sıcak başlatma teknolojisi, ilk PCR denatürasyon aşamasına kadar enzim aktivitesini inhibe ederek spesifik olmayan amplifikasyonu ve primer bozulmasını önlerken hedef amplikonların daha fazla verimine izin verir.
Geniş amplikon uzunlukları aralığında çok yönlülük. Platinum SuperFi II DNA Polimeraz (en soldaki panel), 100 ng insan genomik DNA’sından amplifiye edilmiş 0,3 kb ila 14 kb arasında değişen DNA fragmanları aralığında yüksek özgüllük ve verim sağlar. Aynı hedefler rakip DNA polimerazları kullanılarak da amplifiye edildi: A—Merck KOD Hot Start, B—KAPA HiFi HotStart PCR Kit, C—PrimeSTAR GXL. Moleküler ağırlık markörü TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder’dır. |
Yüksek Hassasiyet
Platinum SuperFi II DNA Polimerazın yüksek hassasiyeti, düşük miktarda DNA şablonlarının doğru sonuçlarla tespit edilmesini sağlar. Sınırlı miktarda başlangıç materyali bulunan veya numunede hedef DNA’nın düşük konsantrasyonda olduğu deneylerde yüksek duyarlılık avantajlıdır.
Düşük miktarda giriş DNA’sından yüksek hassasiyet ve güvenilir amplifikasyon. Platinum SuperFi II DNA Polimeraz (en soldaki panel) 0,4 ng, 2 ng, 10 ng, 50 ng ve 250 ng insan genomik DNA’sından 2 kb’lik bir fragmanın güvenilir amplifikasyonunu gösterir (şablon miktarları her şeridin üzerinde belirtilmiştir). Aynı hedef rakip DNA polimerazlarıyla amplifiye edildi: A—PfuUltra II Fusion Hot Start, B—HotStar HiFidelity DNA Polimeraz Kiti, C—Expand HiFiPLUS Enzim Karışımı. Tahmini kopya sayısı, 0,4 ng insan genomik DNA’sı başına ~100 kopyadır. Moleküler ağırlık markörü TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder’dır. |
PCR için Doğrudan Jel Yükleme
Platinum SuperFi II Green PCR Master Mix, PCR ürünlerine doğrudan jel yükleme kolaylığı sağlayarak, PCR numunelerine zahmetli boya ekleme adımlarını ortadan kaldırır ve pipetleme hatalarının azaltılmasına yardımcı olur. Yeşil tampon, DNA dizilimi, ligasyon ve kısıtlama sindirimi dahil olmak üzere akış aşağı uygulamalarla uyumludur.
Invitrogen™ Platinum™ SuperFi II DNA Polimeraz
İnhibitörlere Karşı Direnç
Platinum SuperFi II DNA Polimeraz, hemin (kırmızı kan hücresi bileşeni), ksilan (bitki biyopolimeri) ve hümik asit (toprakta bulunur) gibi yaygın PCR inhibitörlerine karşı yüksek işleme ve artan tolerans sağlayan bir DNA bağlama alanı ile tasarlanmıştır.
Platinum SuperFi II DNA Polimeraz, yaygın PCR inhibitörlerine karşı yüksek tolerans gösterir. 2 kb insan genomik DNA fragmanı, Platinum SuperFi II DNA Polimeraz veya rakip yüksek kaliteli DNA polimerazları kullanılarak 50 ng insan genomik DNA’sından amplifiye edildi: A—Q5 Hot Start High-Fidelity, B—PrimeSTAR GXL, C—Merck KOD Hot Start , ve D—KAPA HiFi HotStart PCR Kiti 1-inhibitörsüz, 2-hümik asit (4 µg/mL), 3-hemin (20 µM) veya 4-safra tuzu (1 mg/mL) içeren reaksiyon karışımlarında. Moleküler ağırlık markörü TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder’dır. |
Benchtop Stabilitesi
Platinum SuperFi II DNA Polimeraz enziminin oda sıcaklığında genişletilmiş kararlılığı, yüksek verimli uygulamalara olanak tanır. Üstün Platinum sıcak başlatma teknolojisi, enzimin tezgah üstü stabilitesine ve yüksek özgüllüğüne izin verir.
Platinum SuperFi II DNA Polimeraz ile birleştirilmiş reaksiyonlar, sabit oda sıcaklığındadır. 0.5 kb’lik bir parça, 50 ng insan genomik DNA’sından amplifiye edildi. PCR reaksiyonları kuruldu ve Applied Biosystems ProFlex termal döngüleyiciye yüklenmeden önce 0 ve 24 saat oda sıcaklığında bırakıldı. 24 saatlik oda sıcaklığında kurulumdan sonra bile, Platinum SuperFi II DNA Polimeraz (şerit P), yüksek özgüllük ve verim ile sonuçlar üretir. Aynı deney, rakip DNA polimerazlarıyla da gerçekleştirilmiştir: A—Q5 Hot Start High-Fidelity, B—KAPA HiFi HotStart PCR Kit, C—PrimeSTAR GXL. Moleküler ağırlık markörü TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder’dır. |
Evrensel Protokol
Yenilikçi reaksiyon tamponu sayesinde Platinum SuperFi II DNA Polimeraz, tüm testlerin birlikte çevrimi için evrensel bir tavlama sıcaklığına ve esnek uzatma süresine izin verir.
Evrensel PCR protokolü tarafından etkinleştirilen zaman tasarrufu ve test birlikte çevrimi. Geleneksel PCR reaktiflerini kullanan PCR deneyleri, farklı primer tavlama sıcaklıkları ve uzatma adımları nedeniyle her DNA parçasının amplifikasyonu için özel protokoller gerektirir; bu nedenle, çoğu zaman aynı PCR çalışmasında birden fazla hedef birlikte amplifiye edilemez. Platinum SuperFi II DNA Polimeraz ile, evrensel primer tavlama sıcaklığına ve amplifiye edilecek en uzun parça için seçilen uzatma süresine sahip tek bir protokol kullanılarak farklı PCR testleri birlikte döngüye alınabilir. | Platinum SuperFi II DNA Polimeraz, daha kısa ve daha uzun amplikonların birlikte çevrimini sağlar. 0.7 kb, 2.0 kb, 4.8 kb ve 14 kb fragmanlar 100 ng insan genomik DNA’sından dört hedefin tümü için aynı protokol kullanılarak amplifiye edildi: 10 saniye için 98°C denatürasyon, 10 saniye için 60°C tavlama, 72°C 7 dakika uzatma Uzatma süresi, en uzun hedefin uzunluğuna dayanıyordu. |
Platinum SuperFi II PCR DNA Polimeraz ile 60°C Primer Tavlama
Platinum SuperFi II tamponunun benzersiz formülasyonu, PCR’deki sıkıcı optimizasyon adımını azaltmaya yardımcı olur. Platinum SuperFi II DNA polimeraz ile tavlama adımı için primer erime sıcaklıklarının hesaplanması artık gerekli değildir. Yenilikçi tampon formülasyonu, genel primer tasarım kurallarına uyan dizilerinden bağımsız olarak primerlerin 60°C’de tavlanmasını sağlar. Tampon ayrıca tavlama adımında hesaplanan Tms kullanıldığında başarılı amplifikasyona izin verir.
Platinum SuperFi II DNA Polimeraz, 60°C’de evrensel tavlama sıcaklığından sonra yüksek özgüllük ve verime sahip PCR ürünleri üretir. 60°C tavlama sıcaklığında 50 ng insan genomik DNA’sından 12 hedefi büyütmek için değişen tavlama sıcaklığındaki primer setleri kullanıldı. Moleküler ağırlık belirteci Invitrogen TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder’dır. Belirtilen tavlama sıcaklıkları, Platinum SuperFi DNA Polimeraz için Tm hesaplayıcı kullanılarak hesaplanmıştır. |