Thermo Scientific™ Phusion™ PCR – Site-Directed Mutagenez Kiti
Thermo Scientific™ Phusion™ Alan Hedefli Mutajenez Kiti (Site-directed Mutagenesis Kit), herhangi bir plazmid DNA tipinde nokta mutasyonları, eklemeleri veya silmeleri tanıtmak için çok yönlü ve etkili bir araçtır. Bu kit ile tüm plazmit, istenen değişiklikleri getiren fosforile edilmiş primerler kullanılarak amplifiye edilir. Arzu edilen mutasyonu içeren amplifiye, lineer PCR ürünü, T4 DNA Ligaz ile 5 dakikalık bir ligasyon reaksiyonunda daireselleştirilir. Elde edilen plazmit daha sonra herhangi bir yetkin E. coli hücresine dönüştürülebilir.
Phusion™ DNA Polimerazları için optimal tavlama sıcaklığı, Taq bazlı polimerazlarınkinden önemli ölçüde farklı olabilir.
PCR – Phusion™ Site-Directed Mutagenesis Kit
- Sağlam ve güvenilir üstel amplifikasyon yöntemi
- Hedef plazmit için özel vektörler, kısıtlama bölgeleri veya metilasyon durumu gibi gereksinimler yok
- Ayrı bir adımda başlangıç şablonunu yok etmeye gerek yok
- Phusion Hot Start II High Fidelity DNA Polimeraz istenmeyen ikincil mutasyonları en aza indirir
- 10 kb’ye kadar büyük plazmitlerin amplifikasyonu
- Polimerazın sıcak başlangıç modifikasyonu, PCR’nin ilk döngüsünden önce spesifik olmayan ürünlerin amplifikasyonunu ve primerlerin istenmeyen bozunmasını önler
- Kitte bulunan T4 DNA Ligaz; ligasyondan önce veya sonra saflaştırma adımı yok
- Tüm yetkin E. coli hücre türleri ile uyumludur

Yüksek Kaliteli PCR DNA Polimeraz Enzimleri
High Fidelity PCR enzimleri, klonlama, dizileme veya mutajenez gibi DNA amplifikasyonu sırasında yüksek doğruluk gerektiren uygulamalar için kullanılır. Thermo Scientific Phusion yüksek kaliteli DNA polimerazları, bir dsDNA-bağlama alanının bir Pyrococcus polimeraz benzeri düzeltme okuma enzimine kaynaştırılmasıyla oluşturulmuştur. Bu benzersiz protein füzyon mühendisliği sayesinde, Phusion DNA Polimerazlar çok düşük hata oranlarına, hızlı genişleme oranlarına ve yüksek inhibitör toleransına sahiptir.
Phusion yüksek kaliteli DNA polimerazları çeşitli formatlarda mevcuttur.
Phusion™ Plus DNA Polimeraz | Phusion™ High Fidelity DNA Polimeraz | Phusion™ Hot Start II DNA Polimeraz | Phusion™ Flash High-Fidelity PCR Master Mix | Phusion™ U Hot Start DNA Polimeraz | Phusion™ U Multiplex PCR Master Mix | |
Fidelity (vs. Taq enzimi) | >100x | 52x | 52x | 25x | 25x | 25x |
Tm hesapalaması gerekli | Hayır | Evet | Evet | Evet | Evet | Evet |
Gelişmiş özgüllük (hot-start versiyonu) | Evet | Hayır | Evet | Evet | Evet | Evet |
Amplifikasyon Uzunluğu | 20 kb’a kadar | 20 kb’a kadar | 20 kb’a kadar | 20 kb’a kadar | 20 kb’a kadar | 2.5 kb’a kadar |
Hız | 15–30 sn/kb | 15–30 sn/kb | 15–30 sn/kb | <15 sn/kb | 15–30 sn/kb | 15–30 sn/kb |
GC-rich formatı | Evet | Evet | Evet | Hayır | Evet | Hayır |
dUTP kuruluşu | Hayır | Hayır | Hayır | Hayır | Evet | Evet |
Multipleks PCR için tasarlandı | Hayır | Hayır | Hayır | Hayır | Hayır | Evet, 20 target’a kadar |
Bağımsız enzim formatı | Renksiz | Renksiz Yeşil | Renksiz Yeşil | Renksiz Yeşil | ||
2x master mix formatı | Renksiz Yeşil | HF Tamponlu Renksiz GC Tamponlu Renksiz | Renksiz Yeşil | Renksiz | Renksiz | Renksiz Yeşil |